Badania strukturalne prokariotycznych hydrolaz glikozydowych z rodziny GH30 oraz GH35

master
dc.abstract.enLysosomal storage diseases are caused by a defect of the lysosomal enzymes. e.g β-glucocerebrosidase (GH30) in Gaucher disease and β-galactosidase (GH35) in GM1-gangliosidosis. The pharmacological chaperone therapy (PCT) can be used in the treatment of such diseases. New compounds that are candidates for the PCT need to be tested in laboratories. The tests should be performed with the use of human enzymes, however, their production is usually expensive and complicated.The aim of this study was to optimize conditions of the expression, purification and crystallization conditions and searching for the biological function of GH30 protein from Bacteroides fragilis (Bf) and GH35 protein from Caulobacter crescentus (Cc). These proteins in laboratory could replace human enzymes. Expression, purification and crystallization conditions of Bf protein have been optimized. A new crystalline form of Bf (I222), containing three protein chains in the asymmetric unit, has been obtained. The determined structure confirmed that Bf protein has significant similarity to the human β-glucocerebrosidase but does not exhibit enzymatic activity for typical glucosidase substrates. Attempts to optimize expression and purification of Cc were unsuccessful and showed it is impossible to produce Cc protein in the E. coli, and such observation eliminates it as a laboratory model of the human enzyme.pl
dc.abstract.plLizosomalne choroby spichrzeniowe, spowodowane są defektem enzymów lizosomalnych, np. kwaśnej β glukocerebrozydazy (GH30) w chorobie Gauchera oraz β-galaktozydazy (GH35) w GM1-gangliozydozie.Jednym ze sposobów leczenia tych chorób jest terapia farmakologicznymi chaperonami (PCT). Nowe związki będące kandydatami do PCT muszą być testowane w laboratoriach. Najlepiej badać je z wykorzystaniem enzymów ludzkich, jednak ich produkcja jest zwykle kosztowna i skomplikowana.Celem pracy była optymalizacja warunków ekspresji, oczyszczania i krystalizacji, a także poznanie funkcji fizjologicznej białek prokariotycznych, które w warunkach laboratoryjnych mogą zastąpić białka ludzkie, tj: białka GH30 z Bacteroides fragilis (Bf) oraz białka GH35 z Caulobacter crescentus (Cc).Opracowane zostały warunki ekspresji, oczyszczania i krystalizacji białka Bf. Otrzymano nową formę krystaliczną Bf (I222), zawierającą trzy łańcuchy białkowe w jednostce asymetrycznej. Wyznaczone struktury wskazują na znaczne podobieństwo Bf do ludzkiej β glukocerebrozydazy, nie wykazuje ono jednak aktywności enzymatycznej względem typowych substratów. Podjęte próby optymalizacji ekspresji oraz oczyszczania wykazały, że nie możliwa jest produkcja białka Cc w bakteriach E.coli, co dyskwalifikuje je jako laboratoryjny model ludzkiego enzymu.pl
dc.affiliationWydział Chemiipl
dc.areaobszar nauk ścisłychpl
dc.contributor.advisorLoch, Joannapl
dc.contributor.authorPłowaś, Elizapl
dc.contributor.departmentbycodeUJK/WC3pl
dc.contributor.reviewerPiekoszewski, Wojciech - 160149 pl
dc.contributor.reviewerLoch, Joannapl
dc.date.accessioned2020-07-26T20:00:05Z
dc.date.available2020-07-26T20:00:05Z
dc.date.submitted2016-06-21pl
dc.fieldofstudychemiapl
dc.identifier.apddiploma-103271-200293pl
dc.identifier.projectAPD / Opl
dc.identifier.urihttps://ruj.uj.edu.pl/xmlui/handle/item/209804
dc.languagepolpl
dc.subject.enGaucher disease , GM1-ganglisidosis, β-glucosidase, β-galactosidase, chaperonpl
dc.subject.plChoroba Gaucher, GM1-gangliozydoza, β-glukozydaza, β-galaktozydaza, chaperonypl
dc.titleBadania strukturalne prokariotycznych hydrolaz glikozydowych z rodziny GH30 oraz GH35pl
dc.title.alternativeStructural studies of prokaryotic glycoside hydrolase from GH30 and GH35 familypl
dc.typemasterpl
dspace.entity.typePublication
dc.abstract.enpl
Lysosomal storage diseases are caused by a defect of the lysosomal enzymes. e.g β-glucocerebrosidase (GH30) in Gaucher disease and β-galactosidase (GH35) in GM1-gangliosidosis. The pharmacological chaperone therapy (PCT) can be used in the treatment of such diseases. New compounds that are candidates for the PCT need to be tested in laboratories. The tests should be performed with the use of human enzymes, however, their production is usually expensive and complicated.The aim of this study was to optimize conditions of the expression, purification and crystallization conditions and searching for the biological function of GH30 protein from Bacteroides fragilis (Bf) and GH35 protein from Caulobacter crescentus (Cc). These proteins in laboratory could replace human enzymes. Expression, purification and crystallization conditions of Bf protein have been optimized. A new crystalline form of Bf (I222), containing three protein chains in the asymmetric unit, has been obtained. The determined structure confirmed that Bf protein has significant similarity to the human β-glucocerebrosidase but does not exhibit enzymatic activity for typical glucosidase substrates. Attempts to optimize expression and purification of Cc were unsuccessful and showed it is impossible to produce Cc protein in the E. coli, and such observation eliminates it as a laboratory model of the human enzyme.
dc.abstract.plpl
Lizosomalne choroby spichrzeniowe, spowodowane są defektem enzymów lizosomalnych, np. kwaśnej β glukocerebrozydazy (GH30) w chorobie Gauchera oraz β-galaktozydazy (GH35) w GM1-gangliozydozie.Jednym ze sposobów leczenia tych chorób jest terapia farmakologicznymi chaperonami (PCT). Nowe związki będące kandydatami do PCT muszą być testowane w laboratoriach. Najlepiej badać je z wykorzystaniem enzymów ludzkich, jednak ich produkcja jest zwykle kosztowna i skomplikowana.Celem pracy była optymalizacja warunków ekspresji, oczyszczania i krystalizacji, a także poznanie funkcji fizjologicznej białek prokariotycznych, które w warunkach laboratoryjnych mogą zastąpić białka ludzkie, tj: białka GH30 z Bacteroides fragilis (Bf) oraz białka GH35 z Caulobacter crescentus (Cc).Opracowane zostały warunki ekspresji, oczyszczania i krystalizacji białka Bf. Otrzymano nową formę krystaliczną Bf (I222), zawierającą trzy łańcuchy białkowe w jednostce asymetrycznej. Wyznaczone struktury wskazują na znaczne podobieństwo Bf do ludzkiej β glukocerebrozydazy, nie wykazuje ono jednak aktywności enzymatycznej względem typowych substratów. Podjęte próby optymalizacji ekspresji oraz oczyszczania wykazały, że nie możliwa jest produkcja białka Cc w bakteriach E.coli, co dyskwalifikuje je jako laboratoryjny model ludzkiego enzymu.
dc.affiliationpl
Wydział Chemii
dc.areapl
obszar nauk ścisłych
dc.contributor.advisorpl
Loch, Joanna
dc.contributor.authorpl
Płowaś, Eliza
dc.contributor.departmentbycodepl
UJK/WC3
dc.contributor.reviewerpl
Piekoszewski, Wojciech - 160149
dc.contributor.reviewerpl
Loch, Joanna
dc.date.accessioned
2020-07-26T20:00:05Z
dc.date.available
2020-07-26T20:00:05Z
dc.date.submittedpl
2016-06-21
dc.fieldofstudypl
chemia
dc.identifier.apdpl
diploma-103271-200293
dc.identifier.projectpl
APD / O
dc.identifier.uri
https://ruj.uj.edu.pl/xmlui/handle/item/209804
dc.languagepl
pol
dc.subject.enpl
Gaucher disease , GM1-ganglisidosis, β-glucosidase, β-galactosidase, chaperon
dc.subject.plpl
Choroba Gaucher, GM1-gangliozydoza, β-glukozydaza, β-galaktozydaza, chaperony
dc.titlepl
Badania strukturalne prokariotycznych hydrolaz glikozydowych z rodziny GH30 oraz GH35
dc.title.alternativepl
Structural studies of prokaryotic glycoside hydrolase from GH30 and GH35 family
dc.typepl
master
dspace.entity.type
Publication
Affiliations

* The migration of download and view statistics prior to the date of April 8, 2024 is in progress.

Views
14
Views per month
Views per city
Wroclaw
2
Bahadurgarh
1
Chandler
1
Częstochowa
1
Dublin
1
Gainesville
1
George Town
1
Rawalpindi
1
Santo Domingo Este
1
Čakovec
1

No access

No Thumbnail Available