Peptydy antybakteryjne stanowią jeden z głównych oraz najstarszy mechanizm odporności wrodzonej zarówno roślin, jak i zwierząt. Grupa tych cząsteczek jest bardzo zróżnicowana ze względu na budowę, właściwości fizyko-chemiczne oraz występowanie. Łączy je natomiast aktywność przeciwko bakteriom, ale także innym drobnoustrojom, jak grzyby, pierwotniaki oraz wirusy. Co ważne, odpowiedź przeciwdrobnoustrojowa jest niemal błyskawiczna, w przeciwieństwie do aktywacji przeciwciał, które może trwać nawet kilka dni. Ich synteza zachodzi w komórkach konstytutywnie lub w warunkach stanu zapalnego, pod wpływem lipopolisacharydu (LPS), czy cytokin prozapalnych (TNF-α, IL-1β). Oprócz samej aktywności przeciwdrobnoustrojowej, peptydy działają również regulująco na funkcjonowanie reakcji odpornościowych, w tym chemotaksja i aktywacja limfocytów i makrofagów. Celem projektu było zbadanie wpływu przeciwzapalnego białka MCPIP1, na ekspresję peptydów antybakteryjnych w keratynocytach linii HaCaT, po wcześniejszej stymulacji interleukiną-1β. Wykonano transdukcję komórek retrowirusem zawierającym plazmid z sekwencją kodującą białko MCPIP1. Nadekspresję genu ZC3H12A potwierdzono na poziomie białka metodą Western blot oraz na poziomie transkryptu metodą PCR w czasie rzeczywistym. Poziom wybranych transkryptów dla peptydów antybakteryjnych w komórkach z nadekspresją MCPIP1 oraz kontrolnych, po różnych czasach stymulacji zbadano również przy użyciu metody PCR w czasie rzeczywistym. Badania wykazały, iż nadekspresja białka MCPIP1 działa hamująco na wydzielanie peptydów antybakteryjnych w stanie zapalnym wywołanym w komórkach dla wszystkich badanych peptydów (SLPI, LCN2 oraz S100A7) w każdym punkcie czasowym. Największy wzrost wydzielania mRNA dla peptydów antybakteryjnych w komórkach nietransdukowanych, jak i poziom zahamowania reakcji przez białko MCPIP1 zaobserwowano w czasie 24h stymulacji.

Antimicrobial peptides are one of the main and the oldest mechanism of innate immunity in both plants and animals. Groups of these molecules is highly variable due to the construction, the physico-chemical characteristics and the occurrence. It combines the contrary, it is active against bacteria, but also to other microorganisms, such as fungi, protozoa and viruses. Importantly, contrary to the reaction of antibody activation that takes several days the response triggered by antimicrobial peptides is almost immediate. Their synthesis occurs in the cells constitutively or under inflammatory conditions, for example after lipopolysaccharide (LPS) or inflammatory cytokines (TNF-α, IL-1β) stimulation. In addition to the antimicrobial activity, the peptides regulate also the functioning of the immune response, including chemotaxis and activation of lymphocytes and macrophages. The aim of the project was to investigate the role of anti-inflammatory proteins MCPIP1 on synthesis of selected antimicrobial peptides in HaCaT cell line stimulated with interleukin-1β. Cells were transduced with retroviral vector containing cDNA coding for MCPIP1. ZC3H12A gene overexpression was confirmed at the protein level by Western blot, and the transcript level using real-time PCR. In the next step the level of transcripts coding for selected antimicrobial peptides was measured by qRT-PCR in cells overexpressing MCPIP1 and control (transduced with an empty vector). Studies have shown that overexpression of the MCPIP1 inhibits expression of antimicrobial peptides (SLPI, LCN2, and S100A7) in cells activated with proinflammatory cytokine - IL-1β at each time point. The most significant changes were observed after treatment of cells with cytokine for 24h.